Essay ABTS
Het is een analytische methode die een spectrofotometrische meting gebruikt om de antioxidantcapaciteit van een monster te bepalen. Met behulp van een UV-Vis-spectrofotometer wordt de absorptie van een oplossing met de ABTS-+ -drempel gemeten, gegenereerd door oxidatie van de ABST (2, 2'-azinobis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonate), een kleurloze stof in de vorm radicalen worden gekleurd door absorptie bij golflengtekarakteristieken in het zichtbare bereik De toevoeging aan de oplossing van ABTS • + van antioxidantmoleculen, die kunnen werken door zowel waterstof als een elektron over te brengen, bepaalt de reductie van de radicaal tot de kleurloze vorm, met als gevolg verkleuring van het reactiemengsel. Dit bleken, evenredig met de aanwezige hoeveelheid antioxidanten, kan worden gemeten als een afname van de absorptie gedurende een bepaalde tijd bij een specifieke golflengte (734 nm). Het antioxidantvermogen wordt uitgedrukt door vergelijking met de absorptiewaarden gemeten voor bekende hoeveelheden van een antioxidantmolecuul gekozen als referentiestandaard, meestal ascorbinezuur of Trolox (in dit geval we spreken van TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity antioxidant activity.
De meting van het antioxidantvermogen op basis van het gebruik van ABTS heeft het voordeel dat het eenvoudig en snel is. Bovendien maakt het de meting mogelijk van antioxidanten die zowel hydrofiel als lipofiel zijn in een breed pH-bereik. Men dient echter in gedachten te houden dat het gebruikte radicaal (ABTS • +) niet fysiologisch is en niet aanwezig is in biologische systemen en dat problemen van herhaalbaarheid van de meting als gevolg van de reactiekinetiek van de verschillende antioxidanten vaak worden benadrukt.
FRAP (Ferric Reduction Antioxidant Power)
De FRAP-test meet het reducerend vermogen van antioxidanten tegen ijzerionen. Het is een methode gebaseerd op elektronenoverdracht, waarbij ijzerionen van Fe3 + naar Fe2 + gaan. Onder bepaalde omstandigheden van pH (3.6) en in de aanwezigheid van TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazine), vormen deze ionen complexen met verschillende eigenschappen, in het bijzonder het gereduceerde derivaat (Fe2 + -TPTZ) veronderstelt een blauwe kleur met een maximale absorptie bij 593 nm, die spectrofotometrisch kan worden gemeten. Het reducerend vermogen van een antioxidantstof kan daarom worden gemeten als een verandering in de absorptie van de oplossing die het oxidatiemiddel bevat bij de golflengte die is vastgesteld door vergelijking met de variatie ten opzichte van een standaard (bijv. Ascorbinezuur).
De FRAP-test was bedoeld om het reducerend vermogen van het plasma te meten, maar werd vervolgens aangepast om de antioxidantcapaciteit van zuivere verbindingen en complexe matrices te testen. Aangezien deze methode het mogelijk maakt om alleen het reducerend vermogen door middel van elektronenoverdracht te evalueren, waarbij de werking van antioxidanten die werken door waterstofoverdracht volledig wordt genegeerd, kan de bijdrage van moleculen, zoals thiolen en eiwitten, die een antioxidantrol spelen, niet worden gemeten. fundamenteel in biologische vloeistoffen (bijv. bloed). Het voordeel van deze methode is dat het een van de eenvoudigste, snelste en minst dure methoden is om de antioxidantcapaciteit in vitro te bepalen.
DPPH TEST
2, 2-difenyl-1-picrilhydrazyl (DPPH •) is een zeer stabiele en in de handel verkrijgbare stikstofradicaal, gekenmerkt door een intense paarsrode kleur, die dof wordt als deze wordt gereduceerd in aanwezigheid van een molecuul met antioxiderende capaciteit. Door spectrofotometrische meting bij 517 nm van de verandering in absorptie van de DPPH-oplossing na reactie met een antioxidantverbinding, is het mogelijk het reducerend vermogen van de teststof te kwantificeren, ongeacht of deze werkt met waterstofoverdracht of elektronenoverdracht. Het resultaat wordt over het algemeen uitgedrukt als IC50, dat wil zeggen de hoeveelheid antioxidant die in staat is om de aanvankelijke DPPH-concentratie met 50% te verminderen.
Dit is een snelle, eenvoudige en goedkope methode. De limieten van deze analytische techniek worden gegeven door de mogelijkheid dat de resultaten van de analyse worden vervormd in het geval waarin de moleculen die worden onderzocht absorberen in hetzelfde golflengtebereik van de DPPH-radicaal of in de aanwezigheid van grote moleculen die sterisch zijn geknoopt en die niet ze komen om te reageren met het reactieve deel van de radicaal. Hierdoor reageert de DPPH tot 1000 keer langzamer met antioxidanten dan peroxylradicalen.
PCL-TEST (fotochemiluminescentie)
De PCL-test is gebaseerd op de reactie van een specifieke radicaalsoort, het superoxide-anion (02 -), fotochemisch gegenereerd door UV-straling, met een verbinding die in staat is chemiluminescentie uit te zenden. De gebruikte marker is luminol, een molecuul dat bij oxidatie door vrije radicalen een licht uitzendt dat met een speciaal instrument kan worden gemeten (Photochem®). De aanwezigheid van antioxidanten in het mengmengsel deactiveert de radicaalsoort die de emissie van chemiluminescentie remt. PCL-analyse is erg snel en gevoelig. Bovendien kunnen met de toepassing van twee verschillende analytische protocollen, ACW (Antioxidant Capacity Water oplosbaar) en ACL (antioxidant Capacity Lipid oplosbaar), de bijdragen aan de totale antioxidantcapaciteit van de in water oplosbare component (flavonoïden, vitamine E) voor dezelfde stof worden gemeten. C, aminozuren, etc.) dan de in vet oplosbare (tocoferolen, tocotrienolen, carotenoïden, enz.). De antioxidantcapaciteit van het onderzochte product wordt verkregen door vergelijking van de waarden die zijn vastgelegd met de metingen met betrekking tot standaardreferentiemoleculen, ascorbinezuur voor het ACL-protocol en Trolox voor het ACW-protocol.
