algemeenheid
Immunofixatie is een laboratoriumtest die de identificatie en typering mogelijk maakt van gamma-globulines die in een biologisch monster aanwezig zijn.
In detail laat de analyse toe om - in het bloed of de urine van de patiënt - de immunoglobulineklassen (IgA, IgG, IgM, IgE of IgD) en het type lichte keten kappa of lambda te bestuderen , afhankelijk van hun specifieke elektroforetische mobiliteit . Vervolgens impliceert de immunofixatie voor de identificatie van welk gamma-globuline de inoculatie van specifieke antigenen voor het fragment of het overeenkomstige antilichaam ( anti- immunoglobuline-antisera ): de aanwezigheid van de vermoedelijke wijziging wordt bevestigd door de formatie van een precipitaat, zichtbaar voor het blote oog of microscoop.
Deze informatie is van groot belang voor het vaststellen van, in het bijzonder, de diagnose van plasmacelpathologieën (gammopathieën of plasmaceldyscrasieën). Immunofixatie is zeer nuttig voor de evaluatie en monitoring van multipel myeloom, de macroglobulinemie van Waldenström en primaire amyloïdose (ook lichte amyloïdose genoemd).
Wat
Immunofixatie (of immuno-elektroforese, ook afgekort tot het acroniem IFE ) is een techniek die in staat is om te bepalen of en welke klasse van immunoglobulinen (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) of type lichte keten kappa of lambda aanwezig is in teveel of defect in het bloedserum en de urine van de patiënt.
De kappa- en lambda-lichte ketens karakteriseren de monoklonale component, dat wil zeggen de antilichamen met dezelfde identieke chemische structuur.
Immunofixatie van serum en urine: wanneer wordt dit aangegeven?
Plasmacellulaire dysplasieën of gammopathieën zijn een heterogene groep aandoeningen met onbekende oorzaak gekenmerkt door:
- Onevenredige proliferatie van een B-celkloon ;
- Aanwezigheid in het serum en / of urine van een type immunoglobuline (of zijn polypeptidesubeenheid), structureel en elektroforetisch homogeen ( monoklonaal ).
Normaal gesproken worden dyscrasieën in de plasmacel gediagnosticeerd met behulp van elektroforese van serum- en urinaire eiwitten, gevolgd door serum-immunofixatie (IFE).
Tegelijkertijd kan een bloedtest worden voorgeschreven om de totale concentratie van immunoglobulines (IgG + IgM + IgA) te meten.
Om meer te leren: Immunoglobulinen - Wat ze zijn, Hoe ze worden gemeten en Referentiewaarden »Immunofixatie: basisprincipe
Immunofixatie is een onderzoek dat twee fasen omvat (eerst de elektroforese in agarosegel, daarna de immunoprecipitatie met specifieke antisera ).
De eerste stap van immunofixatie is dezelfde als die van de ELECTROFERISIE van eiwitten (of protidogramma), daarom is het noodzakelijk om een concept te onthouden:
- Elektroforese is een laboratoriumanalyse die het mogelijk maakt om de hoeveelheid eiwitten in het bloedserum of in andere biologische monsters te bepalen en voor elke fractie te onthullen of er afwijkingen in kwaliteit zijn. In het bijzonder maakt dit onderzoek de scheiding van eiwitten in vijf groepen mogelijk: albumine, alfa-1-globuline, alfa-2-globuline, beta-globuline en gamma-globuline ; de laatste worden specifieker onderzocht met immunofixatie.
- Elektroforese is een scheidingsmethode gebaseerd op de verschillende migratiesnelheid van elektrisch geladen deeltjes, door een oplossing en een inert ondersteuningsmedium, onder invloed van een elektrisch veld, gegenereerd door een gelijkstroom. In de praktijk maakt het examen gebruik van de elektrische lading en de moleculaire massa van de eiwitten die aanwezig zijn in het monster van de patiënt. Onder de impuls van een elektrisch veld migreren deze macromoleculen en "groeperen" ze op type, waarbij ze op een karakteristieke manier reageren op stress. Het resultaat ( elektroforetische tracering ) bestaat uit verschillende pieken en krommen, waarop de eiwitfracties overeenkomen. Normaal gesproken is de eerste piek, hoger en smaller, die van albumine ; om te volgen, zien we de globuline pieken, veel lager dan albumine. De toename of afname in amplitude en intensiteit van de pieken die zich in het pad vormen, duiden op een grotere of kleinere aanwezigheid van eiwitten in elke categorie; hoe meer eiwitten aanwezig zijn in een band, hoe hoger de respectieve piek. In het geval van gamma-globulines, als men de hoeveelheid van elk van de verschillende klassen (IgA, IgM, IgG enz.) Wil weten, zal het nodig zijn om zijn toevlucht te nemen tot een enkele dosering. In het algemeen geldt dat hoe meer gammaglobulines in een band aanwezig zijn, hoe hoger de respectieve piek is; de hoogte komt overeen met de totale hoeveelheid eiwitten die tot een specifieke categorie behoren.
IMMUNOFISSATION biedt:
1) Agarose- gelelektroforese: het monster van de patiënt (serum of urine) wordt afgezet op een elektroforetische strip, dwz de drager voor migratie (gewoonlijk agarosegel). Door de toepassing van een elektrisch veld, gegenereerd door een gelijkstroom, wordt scheiding in verschillende banden verkregen. In de praktijk migreert elk type van gamma-globuline dat in het mengsel aanwezig is (dwz in het monster van de patiënt) op basis van de molecuulmassa en de elektrische lading. De verschillende elektroforetische mobiliteit van gamma-globulines maakt het mogelijk om ze te identificeren (elk valt samen met een specifieke band in het elektroforetische pad) en om eventuele anomalieën waar te nemen.
2) Immunoprecipitatie met specifieke antisera (fixatie) : specifieke antigenen voor een specifiek antilichaam of fragment worden afzonderlijk toegevoegd aan elke elektroforetische strip (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-lichte kappa of anti-keten) lambda lichte keten). Als een monoklonaal eiwit aanwezig is, zal de interactie van het antigeen met het overeenkomstige antilichaam een smalle band produceren (dit betekent dat het resultaat positief is) en de vorming van een neerslag, zichtbaar voor het blote oog of de microscoop. Ten slotte wordt het monster verwerkt (dwz gewassen en gekleurd) om eiwitten te verwijderen die niet zijn neergeslagen, om het drogen van de gel te verkrijgen en door te gaan met het aflezen van de resultaten.
Waarom het werkt
Waar is Immunofixation voor?
Immunofixatie van het serum is een examen dat is geïndiceerd om ziekten te diagnosticeren of te volgen die worden gekenmerkt door een verandering van gamma-globulines, vooral als het gaat om de productie van de monoklonale component ( monoklonale gammopathie ).
Voor meer informatie: Monoklonale gammopathieën - Wat en welke zijn »Immunofixatie is nuttig in gevallen van vermoedelijke plasmaceldyscrasie en is fundamenteel voor de studie van MIELOMA (en gerelateerde pathologieën) en MGUS (een acroniem voor "monoklonale gammopathieën met een onzekere betekenis").
Deze test stelt ons ook in staat om de macroglobulinemie en lichte keten amyloïdose ( AL ) van Waldenström te evalueren.
Immunofixatie: wanneer wordt het onderzoek voorgeschreven?
De indicatie voor immunofixatie is na klinisch of laboratoriumonderzoek dat de verdenking op veranderingen van monoklonale antilichamen of immunoglobulines in serum of urine doet vermoeden .
Dit onderzoek maakt het bijvoorbeeld mogelijk om het resultaat van seroprotectieve of urinaire elektroforese te verdiepen: wanneer in de elektroforetische tracering de banden die overeenkomen met de gammaglobulinen afwijken van de normaliteit, identificeert de immunofixatie welke van deze eiwitten is gewijzigd, in termen van kwantiteit en kwaliteit.
Samenvattend kan serumimmunofixatie worden voorgeschreven:
- In het geval waarin andere laboratoriumtests een abnormaal resultaat opleveren, in termen van afwezigheid of een kleinere en grotere hoeveelheid plasma-eiwitten ten opzichte van de norm;
- Wanneer de aanwezigheid van ziekten die worden gekenmerkt door de productie van een monoklonale component wordt vermoed, zoals:
- Multiple myeloma en zijn varianten;
- Waldenström's macroglobulinemie;
- amyloïdose;
- Wanneer de patiënt symptomen en tekenen ontwikkelt die wijzen op de aanwezigheid van een monoklonale gammopathie of multipel myeloom, zoals:
- Botpijn;
- bloedarmoede;
- Gemakkelijke vermoeidheid;
- Terugkerende infecties;
- Onverklaarde fracturen.
In het geval van multipel myeloom zijn de elektroforese van eiwitten en immunofixatie van groot nut voor het bewaken van de voortgang van de ziekte (follow-up).
Immunofixatie: op welke monsters kunnen worden uitgevoerd?
De biologische monsters die kunnen worden onderworpen aan immunofixatie zijn hoofdzakelijk:
- Serum (serum-immunofixatie);
- Urine (urinaire immunofixatie);
- Liquor * (liquor immunofixation).
* Opmerking : CSF of cerebrospinale vloeistof is de vloeistof die de hersenen, het ruggenmerg, de schedelzenuwen en de wortels van de wervelkolom doordringt en beschermt.
Normale waarden
Een NEGATIEF resultaat van serum- en urinaire immunofixatie voor monoklonale of polyklonale gammaglobulines wordt als NORMAAL beschouwd.
Gamma globulines
Gamma-globulines vormen 9-20% van de totale plasma-eiwitten.
- Referentiewaarde Gamma-globuline : 0, 9-1, 4 g / dl
Betreffende de totale concentratie van immunoglobulinen ( IgG + IgM + IgA ), wordt aangenomen dat waarden tussen 600 en 2300 mg / dl normaal zijn.
- Referentiewaarde Immunogobulines in serum :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Opmerking : het referentie-interval van het onderzoek kan enigszins variëren, afhankelijk van leeftijd, geslacht en instrumentarium die in het analyselaboratorium worden gebruikt. Daarom is het raadzaam de reeksen te raadplegen die rechtstreeks in het rapport worden vermeld. Er moet ook aan worden herinnerd dat de resultaten van de analyses als geheel moeten worden beoordeeld door de huisarts, die de medische geschiedenis van de patiënt kent.
Hoge waarden - Oorzaken
De toename in gamma-globulines kan zijn:
- Polyklonaal, als de productie van immunoglobulines heterogeen is, dat wil zeggen dat alle componenten van de gamma-globulines - geproduceerd of afgeleid van verschillende plasmacellen - worden beïnvloed door de toename;
- Monoklonaal, wanneer de gammaglobulines worden geproduceerd of afgeleid van een enkel type (kloon) plasmacellen.
De toename van polyklonale gammaglobulines kan geassocieerd zijn met:
- Chronische ontstekingsziekten;
- Reumatoïde artritis;
- Systemische lupus erythematosus;
- Chronische leverziekten (zoals hepatitis en cirrose);
- Acute en chronische infecties;
- Recente immunisaties;
- Sommige tumoraandoeningen.
Hoge waarden van monoklonale gammaglobulines kunnen in plaats daarvan wijzen op de aanwezigheid van:
- Sommige neoplasmata en chronische ontstekingen;
- Multipel myeloom;
- lymfoom;
- Waldenström's macroglobulinemie.
Een overmaat aan gamma-globuline wordt hypergammaglobulinemie genoemd, terwijl een tekort bekend staat als hypogammaglobulinemie .
Lage waarden - Oorzaken
De reductie van gamma-globulines kan wijzen op de aanwezigheid van verschillende ziekten van het immuunsysteem op genetische basis, waaronder agammaglobulinemie, of een secundaire immunodeficiëntie (bijv. AIDS, nierfalen, acute sepsis en het syndroom van Cushing).
De daling van de gamma-globulinewaarden kan ook afhangen van het gebruik van cytostatische geneesmiddelen, immunosuppressiva en steroïden.
Hoe het wordt uitgevoerd
Serumimmunofixatie
Serumimmunofixatie omvat een eenvoudige bloedafname uit de ader van een arm. Het serum wordt verkregen door centrifugatie van het biologische monster; dit maakt het in feite mogelijk de fractie die de cellen (corpusculair deel) bevat te scheiden van de vloeistof van het bloed (plasma). Het bloedserum is vrij van stollingsfactoren (fibrinogeen, factor VIII, factor V en protrombine).
Urinaire immunofixatie
Om urinaire immunofixatie uit te voeren, is het nodig om een kleine hoeveelheid urine in een speciale steriele container te verzamelen. Op basis van de indicaties van de arts en het laboratorium kan het monster worden verzameld zonder een precieze timing ( willekeurig ) of binnen 24 uur .
Immunofixatie van de liquor
De analyse vereist het nemen van een kleine hoeveelheid hersenvocht, door het inbrengen van een naald, in de spinale holte ( lumbaalpunctie ).
voorbereiding
Immunofixatie: hoe bereid je je voor op het examen?
- Voorafgaand aan het nemen van bloedmonsters, kunnen sommige laboratoria vereisen dat u een vasten van ten minste 10-12 uur observeert. Gedurende deze tijd is een kleine hoeveelheid water toegestaan.
- Immunofixatie kan worden uitgevoerd op urine die op een bepaald tijdstip van de dag (willekeurig) of gedurende de 24 uur wordt verzameld, dus het is noodzakelijk vooraf de juiste steriele containers te verkrijgen.
- Wat betreft de immunofixatie van de vloeistof, in plaats daarvan is geen specifieke bereiding noodzakelijk.
Wat kan de uitkomst van het examen veranderen?
Sommige geneesmiddelen kunnen de uitkomst van immunofixatie beïnvloeden. Het is daarom raadzaam om eventuele medicamenteuze therapieën aan de arts te melden.
In de zes maanden voorafgaand aan het onderzoek kan de toediening van vaccins (immunisatie) en het gebruik van geneesmiddelen, zoals fenytoïne, procaïnamide, orale anticonceptiva, methadon en therapeutisch gamma-globuline, de concentratie van immunoglobulines verhogen. Andere geneesmiddelen die het testresultaat kunnen veranderen, zijn corticosteroïden, neomycine, acetylsalicylzuur en chloorpromazine.
Interpretatie van resultaten
Het resultaat van de immunofixatie wordt geëvalueerd in combinatie met de uitkomst van andere analyses. De interpretatie van de bevinding is de verantwoordelijkheid van de huisarts of de referentie-specialist die de veranderingen die een specifiek gamma-globuline beïnvloeden (bijvoorbeeld de band die samenvalt met de immunoglobulinen G) met bepaalde ziekten identificeert en vergelijkt. Deze evaluatie bevestigt of ondersteunt de diagnostische hypothese: in het algemeen kan immunofixatie een normaal gamma-globuline profiel onthullen of een monoklonaal eiwit of een polyklonaal model identificeren.
Zodra de ziekte is gedefinieerd, kan immunofixatie worden uitgevoerd voor:
- Volg de ziekte in de loop van de tijd en volg vervolgens de koers (follow-up);
- Controleer de effectiviteit van het therapeutische protocol .
Voors en tegens van Immunofixation
In vergelijking met eiwitelektroforese, immunofixatie:
- Het is sneller : de resultaten van de immunisatie worden meestal binnen drie uur verkregen;
- Het is gevoeliger (hoewel enigszins): immunofixatie kan een immunoglobuline onthullen dat is uitgesloten van eiwitelektroforese, vooral bij lage concentraties (minder dan 1 gram / liter).
Verder, de immunofixatie:
- Het kan gedeeltelijk worden geautomatiseerd ;
- Het is gemakkelijk leesbaar en interpreteerbaar .
Immunofixatie is echter duurder dan eiwitelektroforese en maakt alleen gamma-globuline-analyse mogelijk .
Normaal resultaat
Bij immunofixatie omvat een normaal pad:
- Een band die samenvalt met het donkere immunoglobuline G ( IgG );
- Een band die overeenkomt met het lichtste immunoglobuline A ( IgA );
- De afwezigheid van de band voor immunoglobuline M ( IgM );
- De kappa- band is dichter dan die van lambda (lichte keten), met een verhouding van 2: 1.
In een normaal resultaat zijn de banden groot en is er een geleidelijke en uniforme vermindering van de kleurdichtheid naar de randen van de immuno-elektroforesestrook.
Polyklonale gamma-globulinen
In sommige gevallen zijn alle immunofixatiebanden in dezelfde mate gelijkmatig verdoezeld. Dit model vertegenwoordigt de aanwezigheid van polyklonale immunoglobulinen . Ook in dit geval zijn de banden breed en is de overgang naar de randen van de immuno-elektroforetische strip geleidelijk. De IgM-band - normaal afwezig - is breed.
Monoklonale gamma-globines
Wanneer een smalle band met scherpe randen kan worden geïdentificeerd in de route van de immunofixatie, betekent dit dat het zoeken naar monoklonale componenten positief is .
De identificatie van een monoklonaal immunoglobuline is nuttig bij de diagnose van de volgende aandoeningen:
- Monoklonale gammopathie van onbepaalde betekenis (MGUS);
- Multipel myeloom;
- Waldenstrom's macroglobulinemie;
- Amyloïdose.
Bovendien kan immunofixatie worden gebruikt om de therapie te volgen in plasmaceldyscrasieën (dwz multipel myeloom en Waldenstrom's macroglobulinemie). Als het niveau van monoklonaal eiwit afneemt of niet detecteerbaar is na chemotherapie, kan dit wijzen op een reactie op de behandeling . Daarentegen is een monoklonaal eiwit dat ondanks behandeling aanhoudt een teken van een ongevoelige ziekte .
Let op . Een negatief immunofixatieresultaat sluit niet altijd een plasmaceldyscrasie uit. Een niet-secretoir multipel myeloom of oligosecretorie kan bijvoorbeeld negatieve resultaten geven, zowel in urine als in serum. Daarom is, als het diagnostische vermoeden voor gammopathie nog steeds hoog is, de bepaling van de verhouding van de Kappa / Lambda Libere-lichteketens ( K / L-verhouding ) aangegeven.
Immunofixatie en diagnose van multiple sclerose
De immunofixatie van hersenvocht (liquor) wordt voorgeschreven wanneer de arts de aanwezigheid van multiple sclerose vermoedt. In dit geval is het pad dat wordt bepaald kenmerkend, omdat het de aanwezigheid van de zogenaamde oligoklonale banden benadrukt. Het resultaat wordt in het laboratoriumrapport als positief vermeld . Er dient rekening te worden gehouden met het feit dat de banden normaal niet worden waargenomen bij serum-immunofixatie, omdat ze correleren met de productie van intrathecale gamma-globulines .
Er dient echter te worden opgemerkt dat deze bevinding niet noodzakelijk de diagnose bevestigt, omdat andere aandoeningen kunnen optreden met oligoklonale banden in de hersenvocht.
Met andere woorden, de identificatie van oligoklonale banden met liquor immunofixatie is zeer nuttig om de diagnose van multiple sclerose te ondersteunen, maar moet door andere onderzoeken worden bevestigd . Andere aandoeningen die dit resultaat kunnen opleveren zijn ontstekingen van het centrale zenuwstelsel, waaronder: HIV-gerelateerde encefalitis, neurosyfilis, neurosarcoïdose, Lyme meningoencephalitis, CNS-maligniteiten, optische neuromyelitis en transverse myelitis.
